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    异丙基硫代半乳糖苷, IPTG

    来源: 作者: 人气:- 发表时间:2014-07-02 09:44:00【

    异丙基硫代半乳糖苷, IPTG, ISOPROPYL-β-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE, DIOXANE FREE

    异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。

    基础信息

    英文名 Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
    别名 IPTG; Isopropyl-beta-D-thiogalactoside
    产品名称 异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷; 异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖甙; 异丙基-beta-D-硫代半乳糖苷
    分子结构
    iptg
    分子式 C9H18O5S
    分子量 238.30
    CAS 登录号 367-93-1
    EINECS 登录号 206-703-0
    IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
    异丙基–β- D-半乳糖苷(IPTG)是一种有效的乳糖操纵子诱导试剂,不可逆结合乳糖阻遏物。乳糖操纵子是一种常用的遗传物质,用于检测转录时的基因内插。IPTG结合阻遏物特定位点,引起构象变化,从而导致其自乳糖操纵子脱离。IPTG与生理诱导剂1,6-allolactose在结构上相似,IPTG克服了β-异乳糖对β-半乳糖苷酶降解的敏感性。由于IPTG不被代谢,使其乳糖作为碳源的生理功能,与乳糖基因表达调控功能相分离。这些特性使得IPTG成为大规模工业生产表达化合物的理想选择。
    IPTG通常连接一个β-半乳糖苷酶底物,例如X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-半乳糖吡喃糖苷CAS:7240-90-6)或bluo-gal (5-溴-3-吲哚基-beta-D-半乳糖吡喃糖苷 CAS:97753-82-7), 用于测定重组有机体的乳糖表型。

    使用方法

    首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
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